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流式细胞检测
发表者:北京博奥森生物      发表时间:2020-5-28

流式检测平台介绍
Bioss在原有的流式细胞仪BD FACSCalibur基础上引进新一代智能化个性化-ACEA NovoCyte系列流式细胞仪。此流式细胞仪已获得医疗器械注册证,可广泛应用于科研及临床领域。配有三激光器(405nm,488nm,640nm), 13个荧光检测通道,可同时完成13个指标检测的多色分析。分析软件可提供客户30天分析试用权,具有高效的数据采集、分析和报告功能、灵活的在线离线补偿功能,可以满足研究人员针对各种类型的细胞或生物颗粒的多色分析等实验需求。


一、检测服务内容

本服务项目主要是使用流式细胞仪对客户提供的细胞样品或全血样品进行检测分析。主要检测内容有:细胞抗原鉴定、细胞分型及鉴定、细胞凋亡检测、细胞周期分析、JC-1等。


二、服务流程 

1

客户提交流式细胞检测请求与实验要求,与体育娱乐网址平台商定具体的实验项目、数量和费用,双方签订《委托流式细胞检测服务合同书》;

2

客户提供检测样品,我体育娱乐网址平台按照协定要求安排检测项目预实验,双方根据预实验结果商定实验技术参数细节;

3

体育娱乐网址平台实验室正式开展检测实验,在规定时间内向客户提交实验数据和检测报告。


三、样品要求

 客户提供信息:1.提供抗体货号及厂家  2.细胞信息  3.实验方案及具体要求

 样品寄送须知:细胞常温, 生长良好,无污染,细胞数量>106个;组织离体后制成单细胞悬液,加入PBS/培养基内4℃运输;血液采集在EDTA/肝素钠的采血管内混匀,4℃运输。

四、交付标准

 上机原始数据,高清散点图直方图密度图等数据分析图片,详细检测报告。

     

      更多详情请见官网:



实验数据分享

细胞抗原鉴定

实验原理:根据抗原-抗体反应原理,检测细胞表面或者胞内抗原,对于同一样品检测不同种抗原,可以分为单标、双标以及多标。实验流程:离心去上清-调整细胞密度-固定穿膜-加入标记抗体-孵育-离心去上清-重悬细胞-上机检测。

实验结果展示:


单染直方图

单染散点图

双染散点图


细胞凋亡检测

实验原理:Annexin V选择性结合磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,简称PS),是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的PS高亲和力特异性结合。在正常细胞中, PS只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的PS由脂膜内侧翻向外侧。使用带有绿色荧光FITC标记的Annexin V,即Annexin V-FITC,则可通过流式细胞仪或荧光显微镜直接检测到PS外翻这一细胞凋亡的重要特征。此方法被公认为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。实验流程:细胞培养-转染或药物处理-细胞收集- Annexin V-FITC/PI标记-上机检测。实验结果展示:

左下象限LL为活细胞;右下象限LR为早期凋亡细胞右上象限UR为晚期凋亡细胞;左上象限UL为碎片及坏死细胞。


Annexin V-FITC(绿色)染色细胞为早期凋亡细胞;PI(红色)染色细胞为坏死细胞;Annexin V-FITC/PI双染细胞为晚凋或坏死细胞


细胞周期检测

实验原理:碘化丙啶(Propidium,简称PI)是一种双链DNA 的荧光染料,PI和双链DNA 结合后可以产生荧光,并且荧光强度和双链DNA 的含量成正比。细胞内的DNA 被PI染色后,可使用流式细胞仪对细胞进行DNA 含量测定,然后根据DNA 含量的分布情况进行细胞周期分析。实验流程:细胞培养-转染或药物处理-细胞收集-细胞周期试剂盒-上机检测。实验结果展示:


细胞周期拟合图


线粒体膜电位检测-JC-1

实验原理:线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。JC-1是一种理想的用于检测线粒体膜电位的荧光探针,可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。其原理是,当线粒体膜电位较高时,JC-1聚集在线粒体基质中,形成聚合物,488nm激发时的最大发射波长为590nm,可以产生红色荧光,在流式上表现为FL1和FL2双阳性;当线粒体膜电位较低时,JC-1不能聚集在线粒体基质中,此时JC-1为单体,488nm激发时最大发射波长为527nm,可以产生绿色荧光,形成流式图汇总所有细胞FL1为阳性。凋亡细胞则大多为FL1单阳性。不同荧光颜色的转变反应线粒体膜电位的变化,常用红绿荧光的相对比例衡量线粒体去极化的比例。实验流程:细胞离心去上清-调整细胞密度-装载探针-孵育探针-上机检测。
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